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產(chǎn)品貨號(hào)：BN12022 

產(chǎn)品規(guī)格：50T, 100T

應(yīng)用范圍：DNA膠回收，PCR or 酶切產(chǎn)物純化 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介 

     本試劑盒用于從瓊脂糖凝膠中快速、可靠地回收DNA，從PCR、RFLP、磷酸化、標(biāo)記、連接、雜交及其他酶促反應(yīng)中純化DNA 片段。100bp至20kb的DNA片段可通過(guò)Mini Column可純化得到，回收率在50~90%。

產(chǎn)品構(gòu)成

要點(diǎn) 

? DNA Wash Buffer：使用前將60 mL 96-100% 乙醇加入至每個(gè) DNA Wash Buffer 瓶?jī)?nèi)。 

? 100 mg 的凝膠相當(dāng)于 100 μL 體積。 

? Buffer GC-A/B：低溫易產(chǎn)生沉淀，使用前請(qǐng)于 37℃水浴加熱至沉淀完全溶解。 

? 65℃預(yù)熱 Elution Buffer 或 ddH2O。 

? 所有操作步驟（包括離心）均在室溫下進(jìn)行。

產(chǎn)品貯存及穩(wěn)定性 

本試劑盒自購(gòu)買(mǎi)之日起可保存 12 個(gè)月。所有試劑及用品可保存于室溫（15-25℃）。

實(shí)驗(yàn)前需準(zhǔn)備的材料 

? 小型臺(tái)式離心機(jī)和 1.5 mL 離心管 

? 55~65℃水浴鍋 

? 負(fù)壓裝置 

? 96~100%乙醇 

? 異丙醇（對(duì)于 200 bp 以下片段的回收）

操作步驟（離心法） 

     1.瓊脂糖凝膠產(chǎn)物純化：從凝膠上割下帶有目的片段的凝膠到一個(gè) 1.5 mL 或 2.0 mL 離心管（稱(chēng)量估算凝膠的體積，確保加入不少于 1 倍體積的 Buffer GC-A），加入 1 倍體積的 Buffer GC-A，置于 55~60℃水浴 8~10 min，期間顛倒混勻 幾次，直至凝膠完全融化，冷卻離心管至室溫。

PCR 產(chǎn)物純化：加入 2 倍體積的 Buffer GC-B （如 100 μ L 的 PCR 反應(yīng)液，加入 200 μ L Buffer GC-B），混合均勻，瞬時(shí)離心，將溶液收集到管底。 

     注：純化 200 bp 以下的 PCR 產(chǎn)物，加入 5 倍體積的 Buffer GC-A/B 到 1 倍體積的 PCR 反應(yīng)液。100 mg 的凝膠相 當(dāng)于 100 μ L。200 bp 以下片段的純化，請(qǐng)加入 1 倍體積的異丙醇。

     2.轉(zhuǎn)移上述混合液（每次不超過(guò) 700 μ L）至一個(gè) Mini Column（自帶 2 mL Collection Tube）），12,000 rpm 離心 1 min， 棄濾液，將 Mini Column 放回 2 mL Collection Tube。重復(fù)此步驟至所有樣品通過(guò)。

     3.加入 600 μ L DNA Wash Buffer，12,000 rpm 離心 30 s，棄濾液，將 Mini Column 放回 2 mL Collection Tube。

     4.重復(fù)步驟 3。 

     注：確保使用前按要求加入乙醇至 DNA Wash Buffer 瓶?jī)?nèi)。

     5.可選：瓊脂糖凝膠產(chǎn)物純化：加入 600 μ L 無(wú)水乙醇，12,000 rpm 離心 30 s，棄濾液，將 Mini Column 放回 2 mL  Collection Tube。 

     注：如果純化的 DNA 產(chǎn)物用于對(duì)鹽敏感的應(yīng)用(如測(cè)序、平末端連接)， 建議采用此步驟。

     6.打開(kāi) Mini Column 蓋子，12,000 rpm 離心 2 min，去除殘留的乙醇。

     注：開(kāi)蓋離心更有利于乙醇的去除。

     7.轉(zhuǎn)移 Mini Column 至一個(gè) 1.5 mL Microfuge Tube，在膜中央加入 30~100 μ L Elution Buffer （ 65 ℃ 預(yù)熱） 或 ddH2O (pH 在7.0~8.5)，靜置 1 min，12,000 rpm 離心 1 min 洗脫 DNA。 

     可選：將洗脫下來(lái)的液體重新上柱，二次洗脫。 

     注：將 Elution Buffer 或 ddH2O 置于 65℃預(yù)熱，或加入洗脫液后將 Mini Column 置于 65℃靜置 5 min 再進(jìn)行洗脫，將會(huì)顯著提高 DNA 回收率。

     注：對(duì)于 8 kb 以上的片段，加入洗脫液后將 Mini Column 置于 65℃靜置 5 min。 

     注：第一次洗脫通常得到 60~70%左右的 DNA。二次洗脫有利于回收剩下 20%的 DNA。

操作步驟（負(fù)壓/離心法） 

     1. 按照離心法中步驟 1 操作。瞬時(shí)離心以收集所有液體至管底。 

     2. 根據(jù)制造商指南安裝負(fù)壓設(shè)備，將 Mini Column 連接到負(fù)壓裝置上。 

     3. 小心轉(zhuǎn)移混合液至 Mini Column 中，打開(kāi)負(fù)壓裝置，允許液體通過(guò)柱子。 

     4. 加入 600 μ L DNA Wash Buffer，打開(kāi)負(fù)壓裝置 1 min。 

     5. 重復(fù)步驟 4。 

     6. 可選：瓊脂糖凝膠產(chǎn)物純化：加入 600 μ L 無(wú)水乙醇，12,000 rpm 離心30 s，棄濾液，將Mini Column 放回2 mL Collection Tube。 

     7. 打開(kāi)負(fù)壓裝置，干燥空柱子 5 min。 8. 將 Mini Column 轉(zhuǎn)移至一個(gè) 1.5 mL Microfuge Tube，在膜中央加入 30~100 μ L Elution Buffer 或 ddH2O，靜置 1 min，12,000 rpm 離心 1 min 洗脫 DNA。

     注：將 Elution Buffer 或 ddH2O 置于 65℃預(yù)熱，或加入洗脫液后將 Mini Column 置于 65℃靜置 5 min 再進(jìn)行洗脫，將會(huì)顯著提高 DNA 回收率。 

     注：第一次洗脫通常得到 60~70%左右的 DNA。二次洗脫有利于回收剩下 20%的 DNA。